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  • 杂志名称:疾病监测杂志
  • 主管单位:中国疾病监测
  • 主办单位:中华人民共和国卫生部
  • 国际刊号:11-2928/R
  • 国内刊号:11-2928/R
  • 出版周期:月刊
期刊荣誉:荣获2003年《CAJ-CD规范》执行优秀期刊奖期刊收录:知网收录(中), 哥白尼索引(波兰), 上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, CA 化学文摘(美), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中)
疾病监测杂志2013年第02期

TaqMan探针实时荧光定量反转录-聚合酶链反应检测新布尼亚病毒L基因方法的建立与应用

虞吉寅;王忠发;任宜;毛彬

关键词:Real-time RT-PCR, 新布尼亚病毒, 核酸检测
摘要:目的 建立敏感、特异、实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,rRT-PCR)方法,用于新布尼亚病毒的核酸检测.方法 以新布尼亚病毒L基因为靶基因设计引物以及TaqMan探针,建立real-time RT-PCR方法,并对舟山市岱山县50份临床疑似患者血清、血浆、25份正常人群血清和从患者血清中分离到的2株病毒样本进行了检测鉴定,并验证了方法的特异性、敏感性和重复性.结果 建立的real-time RT-PCR具有良好的特异性,标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(R2 =0.999),低检出浓度为1拷贝/μl,重复性评估批内变异系数均<1.0%.在103份检测标本中,50份临床病例血清血浆标本,30份为阳性,健康人群血清25份和28份鼠肺、鼠肾均为阴性,8份病毒分离培养血样中2份为阳性.结论 本研究建立的real-time RT-PCR方法具有较高的特异性、敏感性和重复性,可用于人与动物新布尼亚病毒核酸的快速检测、病毒分离培养的初步鉴定等.