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  • 杂志名称:疾病监测杂志
  • 主管单位:中国疾病监测
  • 主办单位:中华人民共和国卫生部
  • 国际刊号:11-2928/R
  • 国内刊号:11-2928/R
  • 出版周期:月刊
期刊荣誉:荣获2003年《CAJ-CD规范》执行优秀期刊奖期刊收录:知网收录(中), 哥白尼索引(波兰), 上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, CA 化学文摘(美), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中)
疾病监测杂志2011年第08期

琼脂糖凝胶电泳与核酸印迹杂交法检测细菌毒力基因PCR产物的灵敏度比较研究

綦廷娜;刘志广;王涛;李培京;叶长芸

关键词:核酸印迹杂交, 琼脂糖凝胶电泳, 肠出血性大肠埃希菌0157:H7, 猪链球菌2型, stx2基因, cps2J基因, 检测灵敏度
摘要:目的 探讨核酸印迹杂交法在检测细菌毒力基因方面的应用价值.方法 分别以10倍连续稀释的0157:H7肠出血性大肠埃希菌和血清2型猪链球菌染色体提取物为模板,与志贺毒素2基因(stx2)和荚膜多糖2J基因(cps2J)特异性引物进行聚合酶链式反应(PCR).用1%琼脂糖凝胶电泳及核酸印迹杂交法检测PCR产物,比较两种方法的低检测限.结果 1%琼脂糖凝胶电泳对EDL933菌株:stx2基因PCR产物的低检测限为6.7 × 10(2)cfu(56.87 pg)/PCR体系,对SC84菌株cps2J基因PCR产物的低检测限为4.3 × 10(2)cfu (12.65 pg)/PCR体系;核酸印迹杂交法对EDL933菌株stx2基因PCR产物的低检测限为6.7 × 10(-1)cfu (56.87 fg)/PCR体系,对SC84菌株cps2J基因PCR产物的低检测限为4.3 × 10(-1)cfu (12.65 fg)/PCR体系.结论 用核酸印迹杂交法检测肠出血性大肠埃希菌stx2基因和猪链球菌cps2J基因PCR产物的灵敏度均比普通琼脂糖凝胶电泳检测法高了1000倍.