期刊简介
本刊积极贯彻“预防为主”的工作方针，突出快、简、新和实用性强的特色，及时准确地向国内外报道传染病疫情及动态。
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首页>疾病监测杂志
- 杂志名称：疾病监测杂志
- 主管单位：中国疾病监测
- 主办单位：中华人民共和国卫生部
- 国际刊号：11-2928/R
- 国内刊号：11-2928/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：荣获2003年《CAJ－CD规范》执行优秀期刊奖期刊收录：知网收录(中), 哥白尼索引(波兰), 上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, CA 化学文摘(美), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中)
多种一步法快速提取DNA对肺炎支原体PCR检测的影响
张军鸽；赵飞；刘立雍；马闪珊；单小云
关键词：一步提取法, 肺炎支原体, 聚合酶链反应, 临床标本
摘要：目的 对比不同一步法提取DNA在肺炎支原体PCR检测中的效果及应用范围,为临床标本中肺炎支原体的检测提供依据.方法 以两种经典的DNA提取一步法(ROSE和Chelex-100法)及其优化方案和商品化DNA提取试剂盒,提取肺炎支原体纯培养菌株及30份肺炎支原体阳性临床咽拭子标本DNA,分别进行普通PCR和荧光PCR检测,对比不同方法提取的DNA对PCR检测结果的影响.结果 ROSE法和Chelex-100一步法中的SDS严重影响Taq酶活性,提取物稀释100倍方可进行荧光PCR扩增,稀释10倍可用于普通PCR扩增.改良的Chelex-100一步法提取肺炎支原体纯菌DNA产量高,且PCR扩增效果好.对于30份临床标本来说,试剂盒法、改良Chelex-100法和水煮法的阳性率分别为100.00％(30/30)、80.00％ (24/30)和43.33％(13/30),且对相同肺炎支原体阳性标本提取的DNA,试剂盒法检测的循环阈值(Ct值)比上述两种方法分别小1.95和2.38.结论 经典一步法提取的DNA必须经稀释后方可作为扩增模板.改良的C helex-100法操作简便,可用于纯菌培养的DNA提取.临床标本中肺炎支原体DNA提取以试剂盒法优,改良的Chelex-100法提取的DNA也可用于临床标本中肺炎支原体的检测,但不可用于定量分析.
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