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  • 杂志名称:疾病监测杂志
  • 主管单位:中国疾病监测
  • 主办单位:中华人民共和国卫生部
  • 国际刊号:11-2928/R
  • 国内刊号:11-2928/R
  • 出版周期:月刊
期刊荣誉:荣获2003年《CAJ-CD规范》执行优秀期刊奖期刊收录:知网收录(中), 哥白尼索引(波兰), 上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, CA 化学文摘(美), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中)
疾病监测杂志2016年第02期

建立检测产气肠杆菌的TaqMan荧光定量PCR和普通PCR方法

王怡倩;叶长芸

关键词:产气肠杆菌, 普通PCR, TaqMan荧光定量PCR
摘要:目的 建立敏感、特异的普通聚合酶链反应(PCR)方法和TaqMan荧光定量PCR方法对产气肠杆菌进行快速检测.方法 以产气肠杆菌组氨酸脱氢酶基因(hdc)为靶基因设计引物以及TaqMan FAM探针,建立对产气肠杆菌进行检测的普通PCR方法和TaqMan荧光定量PCR方法,并评价该方法的特异性、灵敏性和稳定性.结果 普通PCR和TaqMan荧光定量PCR方法均能对产气肠杆菌进行特异检测;普通PCR方法对质粒标准品和粪便模拟标本的检测下限分别为100 copies/μl和1.0×105 cfu/g,TaqMan荧光定量PCR方法对质粒标准品和粪便模拟标本的检测下限分别为33copies/μl和1.0×104 cfu/g;TaqMan荧光定量PCR方法对质粒标准品和粪便模拟标本检测的扩增曲线良好;在稳定性评价试验中,普通PCR方法的重复性良好,TaqMan荧光定量PCR方法对质粒标准品检测Ct值的组内差异为0.15%~0.98%,组间差异为0.55%~1.63%.结论 本研究建立的检测产气肠杆菌的普通PCR方法和TaqMan荧光PCR方法特异性好、灵敏度高,能够用于产气肠杆菌的快速检测.